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免疫組化常見脫片原因及解決

來源:http://huangdiguli.cn/    日期:2018-11-29    瀏覽量:載入中...

免疫組化,其實方法和操作都不是很難,關鍵是結果出現(xiàn)異常時如容易出現(xiàn)組織脫片該如何去解決?我們先了解一下組織脫片的原因有哪些?
1.空白片少,經(jīng)不起反復折騰;
2.回顧性研究中不可能使用新鮮的切片組織;
3.某些單位先前并沒有使用防脫載玻片保留組織標本等。
針對這些問題,可以嘗試如下改良方法。

針對這些問題,可以嘗試如下改良方法。
如上所說,先采用酶修復,后熱修復,一般熱修復是直接置于相應的修復液中煮沸,期間還有可能使用高壓鍋。
1. 酶修復,各自抗原特性選擇,有些時候酶修復的時間是極其難把握的。時間太長,消化過頭容易脫片;時間太短,抗原暴露不充分,這些都影響實驗結果。建議稀釋濃度,延長修復時間。
2. 熱修復,理論基礎:抗原修復時僅需要組織與修復液接觸,且只要薄薄的一層就能反應。
改良一:敞開高壓鍋蓋,置一鐵架于修復液面,其上放置玻片,玻片上滴加修復液體(鐵架高度以沸騰修復液不會觸及玻片為妥)。為了防止玻片上的修復液揮發(fā),可在滴加修復液后蓋上蓋玻片,提供熱源使修復液保持沸騰狀態(tài),使用熱蒸汽加熱。

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優(yōu)點:避免了組織在液體中的劇烈沸騰,減少脫片。
缺點:降低了抗原修復的溫度,可能導致某些抗原無法達到其修復所需溫度,使用此法可能需要適當延長熱修復時間。
改良二:修復液煮沸后,滴加于載玻片上,覆蓋蓋玻片,用實驗室常見的封口膜將玻片和蓋玻片包繞(包繞的目的不是為了隔絕空氣,而是防止蓋玻片移動導致修復液在組織表面揮發(fā),封口膜受熱后收縮,即可固定)。將包繞好的玻片置入鐵架上,按原先操作繼續(xù)(可放入高壓鍋中)。

優(yōu)點:避免了改良一中可能無法達到所需修復溫度的問題,可以放入高壓鍋中。
缺點:片子變成平鋪展開,一次所能做的片子數(shù)目減少。

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需要注意的是,使用蓋玻片后,尤其是使用封口膜后,揭片的過程一定要輕柔,用鑷子,避免徒手操作,如遇到揭片困難,可適當用 PBS 沖洗,不可暴力揭片,否則適得其反;另外由于每個實驗室條件不同,還應根據(jù)自己所在實驗室條件調整。

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